Анотація до роботи:

Волчик І.В. Застосування методів in vitro на етапах доклінічного вивчення лікарських засобів. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата фармацевтичних наук за спеціальністю – 14.03.05 – фармакологія. – Національний фармацевтичний університет, Харків, 2006.

Дисертація присвячена експериментальному вивченню вітчизняних гепатопротекторів за допомогою методів in vitro. На культурі гепатоцитів були змодельовані ураження клітин тими ж токсинами, що й на тваринах. Дія токсинів призводила до загибелі приблизно 50 % гепатоцитів в культурі.

На моделі з використанням СС1₄ була показана можливість визначення ефективних концентрацій гепатопротекторів in vitro. Виживаність клітин в культурі після внесення гепатопротекторів на фоні ураження їх токсином різко зросла.

Вивчення біохімічного стану гепатоцитів в культурі під впливом токсинів показало зростання, майже в 2 рази, таких показників, як АЛТ, АСТ, ЛФ, ЛДГ, g-ГТП, МДА, ДК, що є маркерними для визначення патології печінки in vivo. Дія гепатопротекторів призвела до нормалізації цих показників. Морфологічний стан та морфометричні показники гепатоцитів в культурі після впливу на них токсинів мали негативні зміни. Дія гепатопротекторів практично повністю усунула ці зміни.

При порівняльному аналізі такі ж зміни біохімічних показників, морфологічного стану гепатоцитів та їх морфометричних показників спостерігалися при моделюванні ураження щурів тетрахлорметаном.

Фармакоекономічний аналіз показав явну перевагу методу з використанням культури клітин у порівнянні з традиційним методом з використанням тварин.

Результати досліджень за темою дисертації стали основою для впровадження методу з використанням клітинних культур при дослідженні фармакологічних та токсикологічних властивостей лікарських засобів.

Теоретично обгрунтована та експериментально доведена можливість моделювання патології in vitro (на культурі гепатоцитів) за допомогою різних гепатотоксинів, використовуваних з метою створення модельної патології різної етиології на тваринах. Отримані результати свідчать про автентичність методу in vitro традиційно використовуваним методам in vivo. Запропонований метод з використанням культури клітин економічний і гуманний стосовно тварин. Застосування методу in vitro на основі культури клітин відповідає вимогам GLP і директивам ЄС по обмеженню використання тварин у біомедичній практиці.

1. Доведена перспективність застосування культур клітин при дослідженні лікарських засобів

2. Визначені LC₅₀ токсинів на культурі клітин.

3. Визначені ЕС₅₀ лікарських засобів за допомогою культури гепатоцитів.

4. На відтворених різних моделях патології печінки in vitro була показана можливість порівняльного вивчення лікарських препаратів: патологічні зміни біохімічних і морфо-функціональних показників клітин в культурі під впливом гепатотоксинів нормалізуються після внесення досліджуваних гепатопротекторів.

5. Порівняльні дослідження, проведені на культурі клітин і на білих лабораторних щурах, показали наявність однакових тенденцій у змінах біохімічних і морфо-функціональних показниках клітин як in vitro, так і in vivo.

6. Порівняльний аналіз економічних витрат, необхідних для вивчення ефективності гепатопротектора Ліолів in vitro і in vivo, показав очевидну перевагу використання культури клітин на цьому етапы доклінічних досліджень у порівнянні з використанням тварин.

7. Проведені порівняльні дослідження по ефективності використання методів in vitro на деяких етапах доклінічного вивчення лікарських засобів доказали комплаєнтну наукову, економічну та біоетичну перевагу цих методів у порівнянні з традиційними методами з використанням тварин.

Публікації автора:

1. Волчик І. В., Дроговоз С. М., Чернова Т. М. Використання клітинних ліній у фармакології і токсикології. // Одеський медичний журнал. – 2002. - № 4(72). - С. 110. (Особистий внесок здобувача – узагальнення результатів).

2. Волчик І. В., Дроговоз С. М., Чернова Т. М. Переваги використання клітинних ліній для фармакологічних та токсикологічних досліджень. // Фізіологічно активні речовини. – 2002. - № 2(34). – С. 80-82. (Особистий внесок здобувача – узагальнення результатів).

3. Цитопротекторні властивості Глутаргіну у відношенні клітин лінії HepG2 при токсичному впливі гентаміцину в експерементах in vitro. / І. В. Волчик, С. М. Дроговоз, О. В. Доровський, Т. М. Зубченко, О. В. Супрун // Вісник фармації. – 2003. - № 4(36). – С. 95-98. (Особистий внесок здобувача – експериментальні дослідження).

4. Оцінка ефективності дії гепатопротекторів in vitro на моделі ураження клітин лінії HepG2 Д-галактозаміном. / І. В. Волчик, Л. М. Малоштан, В. М. Коваленко, Ю. Ю. Микулинський // Фармацевтичний журнал. – 2004. - № 4. – С. 91-94. (Особистий внесок здобувача – дослідження, статистична обробка даних).

5. Волчик І. В., Малоштан Л. М.. Гепатозахисна активність Глутаргіну in vitro. // Клінічна фармація. – 2004. – Т.8, № 4. – с. 46-49. (Особистий внесок здобувача – проведення експерименту, статистична обробка даних).

6. Волчик И. В., Дроговоз С. М., Прокопищак Н. И. Оценка in vitro эффективности и токсичности препарата лиолив. // Материалы научно-практической конференции «Лекарства – человеку». – Харьков. 2002. – Т. XVII. – С. 106.

7. Волчик И. В. Изучение фармакотерапевтических свойств аргинина глутамата in vitro. // Международный семинар „Лабораторные животные – возможные альтернативы в экспериментальной фармакологии”: Тез. докл. – Харьков. 2002. – С. 45.

8. Волчик І.В., Малоштан Л.М. Вплив гепатопротекторів на біохімічний стан гепатоцитів на моделі ураження СС1₄ in vitro. // Всеукраинская научно-практическая конференция с международным участием „Лекарства-человеку”. Материалы конференции. – Харьков. 2004. – с. 39.

9. Черних В.П., Малоштан Л.М., Дроговоз С.М., Волчик І.В., Микулінський Ю.Ю., Щегільська О.А. Використання тест-системи на основі гепатоцитів у вивченні ефективності біологічно активних речовин. Методичні рекомендації. – Київ. 2005.

10. Волчик И.В., Малоштан Л.Н., Доровской А.В. Изучение гепатопротекторных свойств глутаргина на культуре гепатоцитов человека. // Науково-практична конференція “Досягнення та перспективи використання вітчизняного препарату Глутаргін в клініці внутрішніх хвороб”: Тез. докл. – Харків. 2005. – с. 152.

11. Деклараційний патент на винахід: Спосіб визначення токсичних або фармакотерапевтичних доз лікарських речовин. Волчик І. В., Микулінський Ю. Ю., Дроговоз С. М., Чепелюк В. І., Щегільська О. А. / ₍₁₉₎UA₍₁₁₎66216₍₁₃₎A. - Бюл. № 4 від 15.04.2004. 5с.