Анотація до роботи:

Попандопуло А.Г. Клітинно-тканинні технології у лікуванні хронічних виразково-раневих дефектів нижніх кінцівок. – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня доктора медичних наук за спеціальністю 14.01.03 - хірургія. Інститут невідкладної і відновної хірургії ім. В.К.Гусака Академії медичних наук України, Донецьк, 2007.

Дисертація присвячена проблемі лікування хронічних виразково - раневих дефектів нижніх кінцівок з використанням клітинно - тканинних технологій.

Досліджено морфо - функціональні критерії клітинних популяцій ХВРД. Встановлено, що ХВРД мають ряд загальних характеристик, які не залежать від етіології і виявляються в ступені дезагрегації міжклітинного матриксу та зміною проліферативного потенціалу сполучній тканини. Ці критерії дозволяють прогнозувати ефективність лікування ХВРД. Для оцінки можливості терапевтичної дії за допомогою КТТ проведено in vitro моделювання їх місцевого застосування. Одержані дані доводять доцільність використання КТТ.

Наводяться дані про ефективність розробленого алгоритму в лікуванні 264 хворих з ХВРД з урахуванням патофізіологічних, технологічних і організаційних аспектів застосування біотехнологічних продуктів.

При аналізі клінічних результатів встановлено, що використання КТТ в комплексній консервативній терапії дозволило в 1,2 рази збільшити частоту загоєння ХВРД, знизити тривалість лікування в 2,1 рази та зменшити кількість рецидивів в 2 рази. Використання хірургічної тактики в комбінації з КТТ дозволило досягти загоєння у 88,9% і знизити кількість незадовільних результатів в 2,3 рази та зменшити середні терміни лікування в 1,26 рази.

Робота містить новий підхід до рішення актуальної наукової проблеми - поліпшення ефективності лікування хворих із хронічними виразково - раневими дефектами нижніх кінцівок на підставі розробки концепції про універсальність основних морфо - функціональних проявів хронічного раневого процесу й обґрунтування диференційованої тактики лікування, що включає використання клітинно - тканинних технологій.

1. Патологічна модифікація клітинних популяцій хронічного виразково - раневого дефекту не залежить від етіологічних причин, локалізації, площі й глибини дефекту тканин. Виявлено різницю між морфологічними ознаками клітин культур фібробластів здорової шкіри й фібробластів хронічного виразково - раневого дефекту. Проліферативна активність фібробластів із хронічного виразково - раневого дефекту в 1,5 рази нижче нормальних величин, що проявляється строками формування монопласта в середньому на 22,3±2,8 доби й зниженням швидкості збільшення клітинності культур клітин в 3,7 рази. На фібробластах, отриманих із хронічного виразково - раневого дефекту, не відзначена експресія складових рецепторів колагену, ламініну й фібронектину (2, 4 і 6 ланцюга інтегринів). Відсутність декількох комбінацій рецепторів на фібробластах хронічного виразково - раневого дефекту обумовлює функціональну неповноцінність клітинно - субстратної адгезії й міжклітинних взаємодій, що, у свою чергу, може запускати механізм анаікозу.

2. Хронічний виразково - раневий дефект характеризується рядом цитоморфологічних, функціональних і проліферативних змін клітинних популяцій. Дані зміни корелюють зі ступенем деградації міжклітинної речовини й іншими морфо-функціональними критеріями стану тканини (МТТ - аналіз, PCNA, рівень детекції віментину). Зазначені ознаки можуть лежати в основі висновків про оборотність або необоротність патологічної трансформації тканини в зоні хронічного виразково - раневого дефекту.

3. Для прогнозу ефективності консервативного лікування хронічного виразково - раневого дефекту доцільно виконувати раннє морфологічне дослідження біопсійного матеріалу, зокрема, поляризаційну мікроскопію й ШИК реакцію. У випадку виявлення грубої деградації волокнистих елементів межуточної речовини найбільш ефективною є хірургічна тактика ведення рани.

4. Експериментальні дані (in vitro) по створенню мікс-культур свідчать про стимуляцію й/або відновлення проліферативного потенціалу й ряду інших функціональних характеристик клітинних популяцій хронічного виразково – раневого дефекту, що обґрунтовує застосування клітинно – тканинних технологій для корекції патологічних процесів порушеної репарації тканин у клінічній практиці. За даними порівняльного МТТ аналізу відзначено зростання проліферативної активності мікс-культури в три рази в порівнянні з монокультурою фібробластів хронічного виразково - раневого дефекту (оптична щільність 0,075од. і 0,025од. відповідно). Розрахункові значення клітинності культур свідчать, що при спільному культивуванні можливе збільшення клітинності культури фібробластів хронічного виразково - раневого дефекту в 2,3 рази.

5. У клінічній практиці, для визначення тактики лікування, доцільно використовувати розроблену класифікацію хронічних виразково - раневих дефектів за площею й глибиною ураження. Використання клітинно - тканинних технологій у комплексному лікуванні хронічних виразково - раневих дефектів нижніх кінцівок доцільно проводити відповідно до запропонованого алгоритму - переважно на етапах регенерації раневого ложа й остаточного закриття дефекту.

6. Найбільш ефективним способом очищення хронічного виразково - раневого дефекту є хірургічний (89,9% ефективність). Час виникнення позитивного ефекту становить у середньому 2,3 доби. Альтернативним способом (86,1% ефективність) є механічне очищення. Інші види очищення хронічних ран значно уступають їм за швидкістю підготовки й ефективністю санації патологічного осередку.

7. Використання клітинно - тканинних технологій у консервативному лікуванні хронічного виразково - раневого дефекту дозволяє досягти 66,7% загоєння дефекту й поліпшує результати лікування в 1,2 рази за рахунок прискорення строків епітелізації у порівнянні із традиційною консервативною терапією. При цьому, строки лікування у випадку застосування алогенного матеріалу скорочуються в 2,1 рази, а у випадку використання аутологічного клітинного матеріалу істотно не змінюються. Найкращі результати по загоєнню хронічного виразково - раневого дефекту отримані при застосуванні алогенного фібробластно - колагенового композиту й аутологічних шарів кератиноцитів. Застосування клітинно - тканинної терапії у віддаленому періоді забезпечує більш стійкий позитивний ефект і знижує тяжкість рецидивів місцевого деструктивного процесу в 2 рази.

8. Використання аутологічного фібробластного тканинного еквіваленту не дозволяє оперативно використати цей метод через строки культивування клітинного матеріалу й не має організаційних переваг, у порівнянні з алогенним фібробластним клітинним матеріалом. Ізольоване застосування культивованих шарів аутокератиноцитів не має переваг перед закриттям раневого дефекту традиційними хірургічними методами аутопластики, а у випадку консервативного ведення ран недостовірно поліпшує безпосередні результати лікування.

9. При хірургічному лікуванні хронічного виразково - раневого дефекту кращі результати отримані при відстроченій вільній аутодермопластиці (приживлення на площі до 30% в 10,9% пацієнтів) у порівнянні з одномоментною аутодермопластикою (приживлення на площі до 30% - в 23,9% пацієнтів). Певні переваги належать васкуляризованим клаптям, при яких середні строки лікування становлять 14,5±1,3 доби. У групі із застосованим хірургічним підходом і використанням відомих способів лікування у ранній термін досягнуте загоєння хронічного виразково - раневого дефекту в 74,2% пацієнтів.

10. Використання хірургічної тактики в комбінації із клітинно - тканинними технологіями дозволяє досягти загоєння в 88,9% пацієнтів і знизити кількість незадовільних результатів в 2,3 рази в порівнянні із традиційними хірургічними методами, зменшити середні строки лікування в 1,26 рази за рахунок прискорення епітелізації й поліпшення приживлення аутодермопластик.

11. Кращі безпосередні результати отримані в групі хворих, яким вибрана активна хірургічна тактика ведення хронічних виразково - раневих дефектів у комбінації із клітинно - тканинними технологіями. Консервативне ведення хронічного виразково - раневого дефекту з використанням клітинних технологій має ряд переваг, у порівнянні із класичним консервативним веденням ран, але поступається за результативністю навіть класичному хірургічному підходу.

12. Розвиток рецидивів хронічного виразково - раневого дефекту визначається ступенем корекції основної патології. У строки спостережень 1 рік число рецидивів при використанні клітинно - тканинних технологій у порівнянні із традиційним лікуванням знижується в 1,4 рази. У строки спостережень до трьох років розходження в частоті рецидивування хронічних виразково – раневих дефектів статистично не достовірні.

Публікації автора:

1. Попандопуло А.Г. К вопросу о выборе способа очищения хронических ран // Вестник неотложной и восстановительной медицины. – 2005. – Т.6, № 2. – С. 239-242.

2. Попандопуло А.Г. Эквивалент дермы как индуктор заживления трофической язвы нижних конечностей // Клінічна хірургія. - № 6. – 2005. – С. 27-29.

3. Попандопуло А.Г. Применение аутологичных культур фибробластов в комплексном лечении венозных трофических язв // Вестник неотложной и восстановительной медицины. – 2005. – Т.6, №4. – С.627-629.

4. Попандопуло А.Г. Инфекционные осложнения хронических язв диабетической стопы // Вестник неотложной и восстановительной медицины. – 2006. – Т.7, №2. – С.158-163.

5. Попандопуло А.Г. Использование аллогенного фибробластно-коллагенового композита в лечении трофических язв нижних конечностей различной этиологии // Вестник неотложной и восстановительной медицины. – 2006. – Т.7, №3. – С.396-401.

6. Применение фактора роста фибробластов в комплексном лечении венозных язв нижних конечностей / А.Г.Попандопуло, И.О.Слипченко, Д.А.Зубов, М.И.Миронюк // Вестник неотложной и восстановительной медицины. - 2000. - Т.1, № 1. - С. 23-24.

7. Використання живого еквівалента дерми в комплексному лікуванні венозних трофічних виразок нижніх кінцівок / А.Г.Попандопуло, О.А.Штутін, Р.Г.Васильєв, Г.В.Казаков, І.А.Разєнкова, О.Є.Чуприна // Трансплантологія.- 2003. – Т.4, №1.- С.261-263.

8. Эффект отделяемого хронической раны на биоактивность фактора роста из тромбоцитов в бессывороточной среде и его прямое действие на пролиферацию фибробластов / А.Г.Попандопуло, Э.Я.Фисталь, Д.А.Зубов, И.Ю.Слипченко, Р.Г.Васильєв, И.А.Разенкова // Вестник неотложной и восстановительной медицины. - 2003.- Т.4, №1.- С.94-98.

9. Влияние факторов культивирования на жизнеспособность фетальных фибробластов человека in vitro / А.Г.Попандопуло, Д.Ю.Игнатов, И.О.Слипченко, Р.Г.Васильев, Е.В.Меркулова, И.Г.Герасимов // Вестник неотложной и восстановительной медицины. – 2003. – Т.4, №2. – С.323-325.

10. Использование модифицированного дермального эквивалента в лечении диабетических язв стопы / А.Г.Попандопуло, И.О.Слипченко, Г.В.Казаков, Р.Г.Васильев, И.А.Разенкова // Вестник неотложной и восстановительной медицины. – 2003. – Т.4, №3. – С.489-492.

11. Роль трансплантации стволовых гемопоэтических клеток в регенерации поврежденных тканей / Н.Т.Ватутин, В.К.Гринь, Н.В.Калинкина, Т.С.Кириенко, А.Г.Попандопуло // Український медичний часопис. – 2003. - №3 (35). – С.42-49.

12. Попандопуло А.Г., Штутин А.А., Казаков Г.В. Первый опыт применения эквивалента дермы в лечении трофических язв нижних конечностей // Международный медицинский журнал. – 2003. – Т.9, №2. – С.94-96.

13. Особенности пролиферативной активности культуры фибробластов хронических венозных язв нижних конечностей / А.Г.Попандопуло, О.М.Корчак, Г.В.Казаков, А.А.Штутин, Д.А.Зубов //Вестник неотложной и восстановительной медицины. – 2003. – Т.4, №4. – С.585-589.

14. Оценка жизнеспособности фетальных фибробластов человека in vitro с помощью положений неравновесной термодинамики / А.Г.Попандопуло, Е.В.Меркулова, И.А.Разенкова, И.О.Слипченко, И.Г.Герасимов // Вестник неотложной и восстановительной медицины. – 2004. – Т.5, №2. – С. 305-307.

15. Биологическая активность фибробластов хронических венозных язв нижних конечностей / В.К.Гринь, А.Г.Попандопуло, А.А.Штутин, О.М.Корчак, Г.В.Казаков // Архів клінічної медицини. - №1 (5). – 2004. – С. 14-18.

16. Эффективность использования эквивалента дермы при подготовке трофических язв к аутодермопластике / А.Г.Попандопуло, И.А.Разенкова, И.О.Слипченко, О.М.Корчак, Д.А.Зубов, А.Е.Чуприна, А.С.Казаков // Клінічна хірургія. - №11-12. – 2004. – С.88.

17. К вопросу об обосновании применения культивированных фетальных фибробластов человека в комплексном лечении хронических мезенхимальных дефектов / А.Г.Попандопуло, О.М.Корчак, О.А.Трунова, Д.А.Зубов, И.А.Разенкова // Архив клинической и экспериментальной медицины .- Т.13, № 1-2. – 2004. – С. 55-61.

18. Досвіт використання дермального еквівалента в комплексному лікуванні глибоких опіків / В.К.Гринь, А.Г.Попандопуло, Е.Я.Фісталь, О.М.Корчак, Д.О.Зубов, І.О.Сліпченко // Трансплантологія. – Т.7. -№3. – 2004. – С.270-272.

19. Трансплантация аутологичного эквивалента дермы в хирургическом лечении больных с синдромом диабетической стопы / А.Г.Попандопуло, Н.В.Свиридов, С.М.Антонюк, А.А.Штутин, И.О.Слипченко // Клінічна хірургія. - №4-5. – 2005. – С. 62.

20. Клітинно-тканинна терапія в комплексному хірургічному лікуванні ранового процесу у хворих з ускладненими формами діабетичної стопи / С.М.Антонюк, О.І.Міміношвілі, М.В.Свиридов, А.Г.Попандопуло, А.С.Голодніков // Трансплантологія. - 2004. - Т.7, №3. - С.229-231.

21. Штутин А.А., Попандопуло А.Г. Применение аутологичных культур фибробластов в комплексном лечении венозних трофических язв // Клінічна хірургія. - №11-12. – 2005. – С.63-64.

22 Корчак О.М., Попандопуло А.Г. Возможность функционально-фенотипической модификации фибробластов хронических венозных язв in vitro // Імунологія та алергологія. - №2 - 2006. - С.112.

23. Попандопуло А.Г., Меркулова Е.В., Герасимов И.Г. Интегральная оценка жизнеспособности культивируемых фибробластов: термодинамический подход // Вестник неотложной и восстановительной медицины. – 2006. – Т.7, №1. – С.40-43.

24. Трансплантація аутологічних стромальних стовбурових клітин як метод відновлення клітинних джерел репарації / В.М.Казаков, В.Г.Климовицький, В.К.Гринь, В.М.Пастернак, В.М.Оксимець, А.Г.Попандопуло, С.І.Верещагін, Д.А.Зубов // Травма. - 2006. - Т.7, № 3. - С.368-377.

25. Особенности морфологической структуры трофических язв нижних конечностей различной этиологии / Э.Я.Фисталь, В.В.Арефьев, А.Г.Попандопуло, И.Г.Постолюк, В.В.Солошенко // Хірургія України. - 2006 - №4 (20). - С.88-91.

26. Алгоритм использования аллогенного фибробластно-коллагенового композита в лечении венозных трофических язв / А.А.Штутин, А.Г.Попандопуло, Н.А.Монастырная, Н.В.Адаменко // Серце і судини. - 2006. - № 4 (додаток). – С. 550-553.

27. Классификация трофических язв и хронических ран нижних конечностей / ВК.Гринь, Э.Я.Фисталь, А.Г.Попандопуло, А.А.Штутин, О.И.Миминошвили // Клінічна хірургія. - № 11-12. - 2006. - С.95.

28. Деклараційний патент України на винахід № 68580 А, МПК 7 А61К38/39. Спосіб стимуляції проліферативних процесів у рані шляхом внесення до неї колагенового гелю з культивованими фібробластами / А.Г.Попандопуло, О.Є.Чуприна, Д.О.Зубов, І.О.Сліпченко, Р.Г.Васильєв, О.М.Корчак -№ 2003087368; заявлено 05.08.2003, опубл. 16.08.2004, бюл. № 8.

29. Деклараційний патент України на винахід № 68906 А, МПК А61В17/00, А61В17/32. Спосіб готування еквівалента шкіри, що полягає у створенні його з життєздатних культивованих in vitro кератиноцитів на підкладці, виготовленій з колагенового гелю / І.О.Сліпченко, І.А.Разенкова, А.Г.Попандопуло, Д.О.Зубов, Р.Г.Васильєв, О.М.Корчак, О.Є.Чуприна - №20031110351; заявлено 17.11.2003, опубл. 16.08.2004, бюл. № 8.

30. Деклараційний патент України на винахід № 71740 А, МПК А61В17/322, А01С11/00, А01G23/02. Спосіб лікування трофічних виразок різної етіології і хронічних ранових дефектів / І.О.Сліпченко, А.Г.Попандопуло, Д.А.Попандопуло, Г.В.Казаков, О.Є.Чуприна - №2003119860; заявлено 04.11.2003, опубл. 15.12.2004, бюл. № 12.

31. Деклараційний патент України на винахід № 9785, МПК А61К38/39, А61В17/00. Спосіб хірургічного лікування ранових дефектів діабетичної ступні / А.Г.Попандопуло, С.М.Антонюк, М.В.Свиридов, А.Є.Голодніков, І.А.Разенкова, І.О.Сліпченко - № U200503067; заявлено 04.04.2005, опубл. 17.10.2005, бюл. №10.

32. Деклараційний патент України на винахід № 14670 UA, МПК А61В17/00, A61K 35/54, A61K38/39. Спосіб ранньої аутодермопластики ускладнених форм діабетичної стопи / М.В.Свиридов, А.Г.Попандопуло, І.А.Разенкова - №U200511954; заявлено 13.12.2005,опубл. 15.05.2006,бюл. № 5.

33. Деклараційний патент України на винахід № 5140 UA, МПК А61В17/00, А61В17/322, А61В18/02, С07К14/78. Спосіб виготовлення тканинного еквівалента на основі колагенового гелю, що містить культуру фібробластів / О.Є.Чуприна, А.Г.Попандопуло, Д.О.Зубов, І.А.Разенкова - №20040705585; заявлено 09.07.2004, опубл. 15.02.2005, бюл. № 2.

34. Деклараційний патент України на винахід № 71747 А UA, МПК А61В17/00, А61В17/322, А61М11/02. Спосіб клітинної суспензійної мікродермопластики шляхом нанесення на рану живої культури кератиноцитів / А.Г.Попандопуло, І.О.Сліпченко, І.А.Разенкова, О.М.Корчак, Е.Я.Фісталь, К.Ф.Губенко, А.В.Дмитрієв - № 20031210877; заявлено 01.12.2003, опубл. 15.12.2004 бюл. № 12.

35. Деклараційний патент України на винахід № 13038 UA, МПК А61В17/00. Спосіб лікування залишкових післяопікових ран / Е.Я.Фісталь, А.Г.Попандопуло, Є.В.Чеглаков, Н.М.Фісталь, С.Г.Хачатрян, О.М.Корчак, Д.О.Зубов, І.А.Разенкова, І.О.Сліпченко - № u 200508451; заявлено 31.08.2005, опубл. 15.03.2006, бюл. № 3.

36. Use of in vitro cultured human fibroblasts in a wound treatment / И.О.Слипченко, А.Г.Попандопуло, О.М.Корчак, А.Е.Чуприна //Сборник абстрактов конференции молодых ученых, студентов и студентов молекулярной биологии и генетики.- Киев. - 2003. – С. 262.

37. Morphological features of in vitro cultured human chondrocytes for the purposes of the cell therapy / А.Г.Попандопуло, Д.А.Зубов, И.А.Разенкова, Р.Г.Васильев // Сборник абстрактов конференции молодых ученых, студентов и студентов молекулярной биологии и генетики.- Киев. - 2003. – С.277.

38. Роль pseudomonas aeruginosa в раневом заживлении венозных язв нижних конечностей / А.Г.Попандопуло, Д.А.Зубов, И.С.Слипченко, И.А.Разенкова, О.М.Корчак // Збірник праць науково-практичної конференції «Сепсис. Патогенез, діагностика, та терапія», присвяченої 80-річчю кафедри інфекційних хвороб ХМАПО. – Харків, 2004. – С.183.

39. Комплексный поход к лечению посттравматических нейротрофических язв: комбинированное использование методов реконструктивной хирургии и тканевой инженерии / В.К.Гринь, А.Г.Попандопуло, А.А.Штутин, А.Н.Сотник // Матер. Першого з’їзду Всеукраїнської асоціації пластичних, реконструктивних та естетичних хірургів. – Київ 14-16 квітня 2004. – С. 67-68.

40. Культивированные постнатальные хондроциты человека и возможности их клинического применения / А.Г.Попандопуло, Д.А.Зубов, И.О.Слипченко, И.А.Разенкова, О.М.Корчак // Сборник научных трудов I-ого съезда комбустиологов России.- Москва, 17-21октября 2005. - С.199-200.

41. Изучение фенотипа культивированных фетальных фибробластов-стимуляторов репаративных процессов в ране / О.М.Корчак, А.Г.Попандопуло, О.И.Слипченко, И.А.Разенкова, Д.А.Зубов // Науково-практична конференція з міжнародною участю «Рани мяких тканин та ранова інфекція». – Київ, 15-16 грудня 2005. - С.34.

42. Возможность стимуляции пролиферации фибробластов в хроническом язвенном дефекте in vitro /И.О. Слипченко, А.Г.Попандопуло, Д.А.Зубов И.А.Разенкова, О.М.Корчак // Науково-практична конференція з міжнародною участю « Рани мяких тканин та ранова інфекція». – Київ, 15-16 грудня 2005. - С.34.

43. Опыт применения культивированных фетальных фибробластов в коллагеновом геле с целью стимуляции репаративных процессов при лечении глубоких ожогов / А.Г.Попандопуло, Э.Я.Фисталь, О.М.Корчак, Д.А.Зубов, И.О.Слипченко, И.А.Разенкова, Е.В.Чеглаков // Матер. международной конф. «Современные вопросы лечения термических поражений и их последствий», посвященной 45-летию Донецкого ожогового центра. - Донецк, 3-4 июня 2005. – С. 102-103.

44. Первый опыт клинического использования кератиноцитов в лечении пациентов с последствиями ожоговой травмы / А.Г.Попандопуло, Н.Н.Фисталь, Е.В.Чеглаков, И.О.Слипченко, Д.А. Зубов, И.А. Разенкова // Матер. международной конф. «Современные вопросы лечения термических поражений и их последствий», посвященной 45-летию Донецкого ожогового центра. - Донецк, 3-4 июня 2005. – С. 148-149.

45. Организационные аспекты использования клеточных технологий в лечении дефектов мягких тканей при политравме / В.К.Гринь, Е.Я.Фисталь, А.Г.Попандопуло, Е.В.Чеглаков // Матер. ХХІ з’їзду хірургів України. - Запоріжжя, 2005. – Т.1. – С. 21-23.

46. Адаптация положений термодинамики неравновесных процессов для оценки жизнеспособности фетальных фибробластов / И.Г.Герасимов, А.Г.Попандопуло, В.Г.Адамов, Е.В.Меркулова // Клиническая информатика и телемедицина. - Т.2. - №1. - 2005. - С.106-107.

47. Биотехнологические аспекты культивирования аутокератиноцитов / В.К.Гринь, Э.Я.Фисталь, А.Г.Попандопуло, И.О.Слипченко, Д.А.Зубов // Скорая медицинская помощь. - №3. - 2006. - С. 168-169.

48. Использование аллофибробластов, культивированных in vitro, для лечения ран / И.О.Слипченко, А.Г.Попандопуло, Д.А.Зубов, О.М.Корчак, И.А.Разенкова, А.Е.Чуприна // Цитология. – СПб., 2004. – Т.46, № 10. – С. 941.

49. Инновационные методы воздействия на течение раневого процесса у больных с синдромом диабетической стопы / С.М.Антонюк, Н.В.Свиридов, А.Г.Попандопуло, П.Ф.Головня, И.Б.Андриенко, В.Б.Ахрамеев // Клінічна хірургія. - №11-12. – 2005. – С.5-6.