Анотація до роботи:

Корчак О.М. Функціонально-фенотипічна модифікація фібробластів хронічних венозних виразок з використанням методів клітинного культивування.- Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата медичних наук за спеціальністю 14.03.08 – імунологія та алергологія - Донецький державний медичний університет ім. М. Горького МОЗ України, 2007.

Дисертація присвячена визначенню мембранних рецепторів фібробластів хронічних венозних виразок, здорової шкіри і фетальних фібробластів, відмінностей проліферативної активності та фенотипу цих типів клітин, а також

можливості функціонально-фенотипічної модифікації фібробластів хронічних венозних виразок у мікс-культурі з фетальними фібробластами.

Показано, що на поверхні фібробластів хронічної венозної виразки відсутні деякі молекули активації й адгезії - CD60w, CD58, CD49b, CD49d, CD49f, CD56, HLA-A,B,C, а рівень експресії CD44, CD166, CD54, CD49e, CD141 і CD95 знижений. Виявлені відмінності швидкості проліферації фібробластів здорової шкіри і фібробластів хронічного виразкового дефекту.

Розроблено культуральну модель – микс-культуру фібробластів хронічної виразки і фетальних фібробластів. Показано, що сукупне культивування приводить до збільшення темпів проліферації виразкових фібробластів і відновленню ушкоджених рецепторів, зокрема 2 (СD49b) і 4 (CD49d) ланцюгів інтегринів.

Отримані результати доводять здатність фетальних фібробластів позитивно впливати на функціональні можливості фібробластів хронічної виразки венозної етіології.

У дисертаційній роботі дано теоретичне підґрунтя для вирішення актуальної науково-практичної задачі стосовно доцільності використання культивованих фетальних фібробластів для стимуляції репарації хронічних виразкових дефектів. Показана втрата фібробластами хронічної венозної виразки нижніх кінцівок молекул костимуляції та активації міжклітинних взаємодій (CD58, CDw60, CD141), рецепторів адгезії (СD166, CD56, CD54) і 2, б4 і б6 ланцюгів інтегринів, а також доведена можливість часткового відновлення рецепторного апарату та проліферативної активності фібробластів хронічного виразкового дефекту при сукупному культивуванні з фетальними фібробластами.

1. Установлено, що загальними мембранними антигенами для фібробластів хронічного виразкового дефекту, фібробластів здорової шкіри й фетальних фібробластів в умовах культивування є: CD44, CD147, CD166, CD141, CD140б, CD29, CD49c, CD49e і CD54. Не ідентифікуються CD51, CD104, CD23, CD40, CD36, CLA, CD24, CLІР, HLA-DR, HLA DQ, ІL-1-R, ІL-1-R, CD122, CD126, CDw128, CD106, CD50, CD31, CD62E, CD62P, CD62L, CD41a, CD11a, CD11b, CD11c, CD2, CD22, СD140, CD49a.

2. Визначені фенотипічні відмінності фібробластів хронічного виразкового дефекту і фібробластів здорової шкіри. На виразкових фібробластах не визначаються, або присутні у слідовій кількості CD60w, CD58, 2 ланцюг інтегрину (CD49b), 4 ланцюг інтегрину (CD49d), 6 ланцюг інтегрину (CD49f), CD56 і молекула HLA-A,B,C (р<0,001). Експресія CD44, CD166, CD54, 5 ланцюга інтегрину (CD49e), CD141 і CD95 вірогідно знижена (р<0,01 і р<0,001). Більш високий рівень експресії 3 ланцюга інтегрину (СD49c) на фібробластах хронічного виразкового дефекту (р<0,05) може бути компенсаторною реакцією на втрату інших інтегринових ланцюгів.

3. Виявлено відмінності спектра мембранних маркерів для фетальних фібробластів і фібробластів здорової шкіри. Відсутність 4 ланцюга інтегрину (CD49d), вірогідно знижений рівень СD141 (р<0,01), підвищений рівень СD58 і СD95 (р<0,05) на мембрані фетальних фібробластів можуть бути наслідком малодиференційованого статусу ембріональних тканин.

4. Проліферативна активність при культивуванні максимальна у фетальних фібробластів (утворення моношару на 1,8±0,1 доби), нижче у фібробластів здорової шкіри (7,5±0,4 доби), мінімальна для фібробластів хронічного виразкового дефекту (16,3±0,4 доби, р<0,001).

5. Морфологія фібробластів хронічного виразкового дефекту і їхньої культури має наступні особливості: змінені форма і розміри клітин, визначається вакуолізація цитоплазми, порушена спрямованість росту і полярність клітинної культури.

6. Сукупне культивування фібробластів хронічного виразкового дефекту і фетальних фібробластів приводить до активації проліферації виразкових фібробластів, про що свідчить збільшення темпів росту культури, коли розрахунковий показник кількості клітин на 5 добу культивування становить (116±8)х10³ клітин для мікс-культури в порівнянні з (28±2)х10³ клітин для культивованих ізольовано виразкових фібробластів (р<0,01).

7. Показана можливість часткового відновлення за рахунок синтезу de novo втрачених ланцюгів інтегринових рецепторів (2 і 4) на мембрані фібробластів хронічного виразкового дефекту при сукупному культивуванні з фетальними фібробластами.

Публікації автора:

1. Корчак О.М. Возможность стимуляции пролиферативной активности фибробластов хронических венозных язв нижних конечностей in vitrо // Актуальні проблеми сучасної медицини. Вісник Української медичної стоматологічної академії МОЗ України. - 2006. - Т.6, № 1-2 (13-14) - С. 172-179 (Дисертантка провела МТТ-аналіз клітинних ліній, що досліджувались, та зробила узагальнення результатів досліджень)

2. Попандопуло А.Г., Корчак О.М., Трунова О.А., Зубов Д.А., Разенкова И.А. К вопросу об обосновании применения культивированных фетальных фибробластов человека в комплексном лечении хронических мезенхимальных дефектов // Архив клинической и экспериментальной медицины.- 2004. - Т.13, № 1-2. – С. 55-61 (Дисертантка проводила фенотипування клітинних ліній і аналіз отриманих результатів, брала участь у написанні статті).

3. Попандопуло А.Г., Корчак О.М, Казаков Г.В., Штутин А.А., Зубов Д.А. Особенности пролиферативной активности культуры фибробластов хронических венозных язв нижних конечностей // Вестник неотложной и восстановительной медицины.- 2003. – Т.4, №4. – С. 585-589 (Дисертантка провела пошук літературних даних і статистичну обробку отриманих результатів, брала участь у написанні статті).

4. Зубов Д.О., Сліпченко І.О., Васильєв Р.Г, Корчак О.М., Чуприна О.Є., Попандопуло А.Г., Гусак В.К. Дія синтетичних полісахаридів на проліферативну активність дермальних фібробластів щурів // Експериментальна та клінічна фізіологія та біохімія.- 2003.- №2 (22).- С.18-23 (Дисертантка зібрала літературні дані, у співавторстві написала статтю).

5. Гринь В.К., Попандопуло А.Г., Штутин А.А., Корчак О.М., Казаков Г.В. Биологическая активность фибробластов хронических венозных язв нижних

конечностей // Архів клінічної медицини. - 2004. - №1 (5). - С. 14-18 (Дисертантка провела аналіз особливостей проліферації досліджуваних клітинних ліній при культивуванні, брала участь у написанні статті).

6. Деклараційний патент України на винахід № 68580 А UA, МПК А61К38/39. Спосіб стимуляції проліферативних процесів у рані шляхом внесення до неї колагенового гелю з культивованими фібробластами / Попандопуло А.Г.,

Чуприна О.Є., Зубов Д.О., Сліпченко І.О., Васильєв Р.Г., Корчак О.М. – Заявка №2003087368 від 05.08.2003, опубл. 16.08.2004, Бюл. № 8. -1 с. (Дисертантка провела пошук і аналіз літературних даних, брала участь в оформленні патенту).

7. Деклараційний патент України на корисну модель № 8551 UA, МПК А61В5/00. Спосіб імунофлуоресцентного маркування поверхневих антигенів зафіксованих на скельцях адгерентних клітин в культурі з використанням моноклональних антитіл для флуоресцентної мікроскопії / Корчак О.М., Зубов Д.О., Попандопуло А.Г., Разєнкова І.А., Сліпченко І.О. – Заявка №20041211016 від 31.12.2004, опубл. 15.08.2005, Бюл. № 8. - 2 с.

(Дисертантка розробила запропонований спосіб, провела аналіз літературних джерел, брала участь в оформленні патенту).

8. Деклараційний патент України на винахід № 60185 А UA, МПК В29В13/02 В65В43/00. Пристрій для розкриття культуральних флаконів методом комбінованого фізичного впливу на стінку флакона розпеченою струною / Чуприна О.Є., Попандопуло А.Г., Зубов Д.О., Васильєв Р.Г., Сліпченко І.О., Корчак О.М.- Заявка №2003021736 від 27.02.2003, опубл. 15.09.2003, Бюл. № 9. - 2 с. (Дисертантка провела збір та аналіз літературних джерел за тематикою, брала участь в оформленні патенту).

   Корчак О.М. К вопросу об изучении фенотипа культивированных фетальных фибробластов // Тез. X междунар. конгресса по реабилитации в медицине и иммунореабилитации и III Европейского конгресса по астме: Аллергология и иммунология.- Афины (Греция), 2006.- Т. 6, №3.- С.333-334.

   Корчак О.М. Экспрессия некоторых мембранных маркеров культивированными дермальными и фетальными фибробластами человека // Матеріали VII Укр. науково-практ. конф. з актуальних питань клінічної і лабораторної імунології, алергології та імунореабілітації: Імунологія та алергологія .- Київ, 2005. - №3 – С.88.

   Корчак О.М., Попандопуло А.Г., Слипченко И.О., Разенкова И.А., Зубов Д.А. Изучение фенотипа культивированных фетальных фибробластов-стимуляторов репаративных процессов в ране // Тез. науково-практ. конф. „Рани м'яких тканин та ранова інфекція”: Клінічна хірургія.- Київ, 2005. - №11-12. – С. 34.

   Корчак О.М., Попандопуло А.Г. Возможность функционально-фенотипической модификации фибробластов хронических венозных язв in vitrо // Матеріали VIII Укр. науково-практ. конф. з актуальних питань клінічної і лабораторної імунології, алергології та імунореабілітації: Імунологія та алергологія.- Київ, 2006. - №2 – С.112.

   Слипченко И.О., Попандопуло А.Г., Зубов Д.А., Корчак О.М., Разенкова И.А., Чуприна А.Е. Использование аллофибробластов, культивированных in vitro, для лечения ран // Мат. междунар. симпоз. по биологии клетки в культуре ”Стволовые клетки, регенерация, клеточная терапия”: Цитология. - С.-Петербург, 2004. – Т. 46, №10. – С. 941.

   Попандопуло А.Г., Зубов Д.А., Слипченко И.О., Разенкова И.А., Корчак О.М. Роль pseudomonas aeruginosa в раневом заживлении венозных язв нижних конечностей // Тр. Харьков. науч. конф. Сепсис. Патогенез, диагностика и терапия. – Харьков, 2004. – С. 183.

   Slipchenko I.O., Popandopulo A.G., Korchak O.M., Chuprina A.E. Use of in vitro cultured human fibroblasts in a wound treatment // Abstract Book Conf. Young Scient. PhD St. and St. on Molec. Biol. and Genetics.–Kyiv, 2003. – P. 262.

   16. Попандопуло А.Г., Корчак О.М., Зубов Д.А., Разенкова И.А., Слипченко И.О. Сравнительный анализ пролиферативной активности культур фибробластов в хронических венозных язвах нижних конечностей, острых язвах и непораженной коже // Збірник праць науково-практ. конф. з міжнародною участю „Хірургічне лікування ран та дефектів м'яких тканин” : Клінічна хірургія. – Київ, 2004. - №11-12. – С. 87.

       Попандопуло А.Г., Разенкова И.А., Слипченко И.О., Корчак О.М.,. Зубов Д.А, Чуприна А.Е., Казаков Г.В. Эффективность использования эквивалента дермы при подготовке трофических язв к аутодермопластике // Збірник праць науково-практ. конф. з міжнар. участю „Хірургічне лікування ран та дефектів м'яких тканин” : Клінічна хірургія.- Київ, 2004. - №11-12. – С. 88.