Анотація до роботи:

Литвин Д.І. Експресія p70S6 кінази в трансформованих клітинах епітеліального походження та аденокарциномі ендометрію людини – Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 14.01.07 – Онкологія. – Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України, Київ-2006.

Дисертацію присвячено дослідженню ЕФР-індукованої експресії p70S6Ka, p70S6Kв та фосфорилювання рибосомного білку S6 в клітинах ліній A431, M-HeLa та MCF7; визначенню змін в експресії p70S6K в динаміці розвитку пухлинного процесу in vivo; дослідженню рівнів експресії p70S6K та фосфорилювання рибосомного білку S6 в аденокарциномах ендометрію людини.

В експериментальних дослідженнях показано, що ЕФР індукує експресію генів p70S6Ka та p70S6Kв, а також призводить до фосфорилювання субстрату p70S6K, рибосомного білку S6; ефективність даного впливу знаходиться в прямій залежності від експресії рецептору ЕФР на поверхні клітин.

В дослідах in vivo визначено, що гіперекспресія p70S6Ka та p70S6Kв в пухлинній тканині, ядерна локалізація ізоформ ферменту в пухлинних клітинах та гіперекспресія p70S6Ka в ендотелії судин пухлини властиві початковим етапам розвитку пухлини.

На клінічному матеріалі виявлено гіперекспресію p70S6Ka, p70S6Kв та підвищений рівень фосфорилювання рибосомного білку S6 в аденокарциномах ендометрію людини. Показано, що пухлинним клітинам ендометрію властива ядерна локалізація p70S6Ka та p70S6Kв. Для ендотеліальних клітин судин аденокарцином ендометрію людини властиві гіперекспресія p70S6Ka та підвищений рівень фосфорилювання рибосомного білку S6.

Встановлено, що пухлинні клітини епітеліального походження характеризуються гіперекспресією ізоформ p70S6Ka та p70S6Kв, підвищеним рівнем фосфорилювання рибосомного S6 білку, прогресія пухлинного процесу супроводжується змінами в експресії та внутрішньоклітинній локалізації ізоформ p70S6K. Високий рівень експресії p70S6Ka в ендотеліальних клітинах судин пухлин ендометрію вказує на її залучення до процесів ангіогенезу пухлин.

1. Отримано та охарактеризовано моноклональні антитіла до p70S6Ka, які здатні специфічно розпізнавати як ядерну, так і цитоплазматичну форми p70S6Ka та можуть застосовуватись в біохімічних та імуногістохімічних методах.

2. Встановлено, що наслідком екзогенного впливу ЕФР на клітини епітеліального походження in vitro є підвищення рівня експресії генів p70S6Ka та p70S6Kв. Рівень ЕФР-індукованої транскрипції p70S6Ka та p70S6Kв має пряму кореляцію з рівнем експресії рецептора ЕФР в досліджених лініях клітин.

3. Дія ЕФР in vitro призводить до підвищення рівня фосфорилювання субстрату p70S6K рибосомного білку S6, динаміка якого є різною в клітинах А431, HeLa та МСF7, що характеризуються різним рівнем експресії рецептора ЕФР.

4. З’ясовано, що підвищений рівень експресії p70S6Ka та p70S6Kв в пухлинній тканині карциноми Герена корелює з проліферацією пухлинних клітин та прогресією пухлинного процесу. Визначено, що найвищі показники експресії та ядерна локалізація обох ізоформ властиві раннім етапам розвитку пухлини, показано гіперекспресію p70S6Ka в клітинах судин пухлинної тканини карциноми Герена на початкових етапах розвитку пухлини.

5. Виявлено гіперекспресію p70S6Ka та p70S6Kв на рівні мРНК та білку у більшості зразків пухлин ендометрію людини, а також відмінності в локалізації та рівні фосфорилювання білку S6 в нормальній та пухлинній тканині.

6. Показано, що характерною для пухлинних клітин ендометрію людини є ядерна локалізація p70S6Ka та p70S6Kв.

7. Гіперекспресія p70S6Ka та високий рівень фосфорилювання рибосомного білку S6 в ендотеліальних клітинах судин пухлинної тканини ендометрію людини вказує на можливу участь p70S6Ka в процесах ангіогенезу пухлинної тканини.

Публікації автора:

1. Lytvyn D.I., Dudchenko T.N., Filonenko V.V., Savinskaya L.A., Pogrebnoy P.V. Expression of p70S6 kinase in Guerin’s carcinoma cells upon tumor development // Experimental Oncology. – 2003. - V.25, №2. – С. 149-151. (Дисертант приймав участь в дослідженні експресії ізоформ p70S6K в динаміці розвитку карциноми Герена методом Вестерн-блот аналізу).

2. Lytvyn D.I., Dudchenko T.M., Lizogubov V.V., Usenko V.S., Nespryadko S.V., Vinnitskaya A.B., Vorobyova L.I., Pal`chevskiy S.S., Filonenko V.V., Pogrebnoy P.V. Expression of a- and b-isoforms of р70S6 kinase in human endometrial tumors // Experimental Oncology. – 2003. - V.25, №4, – 274-279. (Дисертант проводив дослідження методами Вестерн-блотинга та ЗТ-ПЛР, приймав участь в аналізі отриманих даних та написанні статті).

3. Lizogubov V.V., Lytvyn D.I., Dudchenko T.M., Lubchenko N.V., Pogrybniy P.V., Nespryadko S.V., Vinnitska A.B., Usenko V.S., Gout I.T., Filonenko V.V. Immunohistochemical analysis of S6K1 and S6K2 expression in endometrial adenocarcinomas // Experimental Oncology. – 2004.- V.26, №4, – 287-293. (Дисертант приймав участь в проведенні імуногістохімічних досліджень, аналізі результатів та написанні статті).

4. Gorbenko H.N., Litvin D.I., Savinskaya L.A., Filonenko V.V. Generation and characterization of monoclonal antibodies to P70 S6 kinase // Abstract book 6^th John Humphrey advanced summer programme in immunology. Molecular basis of immune response. Pushchino. - Russia, 2002. - P.40.

5. Lytvyn D.I., Dudchenko T.M., Filonenko V.V., Savins’ka L.O., Pogribniy P.V. Expression of p70S6 kinase in tumor cells upon the development of Guerin’s carcinoma in vivo // Abstract book Conference for Young Scientists, PhD Students and Students on Molecular Biology and Genetics, Dedicated to the Golden Jubilee of the Double Helix of the DNA and 30 Anniversary of the Institute of Molecular Biology and Genetics NAS of Ukraine. - Kyiv, Ukraine, 2003. - C. 247.

6. Литвин. Д.І., Дудченко Т.М., Неспрядько С.В., Вінницька А.Б., Воробьйова Л.І., Лизогубов В.В., Усенко С.В., Погрібний П.В.// Імуногістохімічний аналіз експресії р70S6 кінази б в пухлинах ендометрію людини // Тези доповідей Установчого з’їзду Українського товариства клітинної біології. - Львів, 2004. - С. 121.

7. Lytvyn D.I., Dudchenko T.M., Soldatkina M.A., Pogrybnoy P.V. EGF influence expression and enzyme activity of p70S6 kinase б and в isoforms // 5th Parnas Conference/The Ukranian Biochemical Journal. - 2005. - V. 77, № 2. - P. 127.

8. Литвин Д.И., Дудченко Т.Н., Неспрядько С.В., Винницькая А.Б., Воробьйова Л.И., Лизогубов В.В., Усенко С.В., Погребной П.В.// Экспрессия б и в-изоформ p70S6-киназы в опухолях эндометрия человека. Евро-Азиатский конгресс по акушерству и гинекологии. Санкт-Петербург, 2004. - С.97.

9. Литвин Д.И., Лизогубов В.В., Солдаткина М.А., Погребной П.В. Экспрессия и ферментативная активность изоформ p70S6 киназы в тканях аденокарцином эндометрия // Материалы международной школы-конференции молодых ученых Системная биология и биоинженерия. - Москва, 2005. - С.148-149.